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实验:联会复合体的染色与观察

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  一、实验目的:
   学习光学显微镜显示联会复合体技术,观察光镜下联会复合体的形态结构
  二、实验原理:
  1977年Moses证明使用光镜可以检查联会复合体,其后发展了许多用于明视野显微镜观察的方法,依靠光镜显示联会复合体,不仅对SC 的构造、功能的研究有用,而且在临床细胞遗传学中对研究染色体异常现象也是有用的,它大大加快了SC的研究特别是X、Y染色体配对行为的研究,并导致了X染色体上一种特殊夹状结构的发现。
  联会复合体是指在减数分裂前期,同源染色体的配对行为所形成的一种特殊结构,由侧线、横线和中央轴三部分组成,在前期的粗线期时结构较典型,它是动植物同源染色体联会时相当普遍的一种结构。
  三、实验用品:
  1、器材:离心机、显微镜、水浴(65℃)、培养皿(直径16cm)、镊子、剪刀、吸管、烧杯、量筒、离心管(10ml)、酒精灯、刻度吸管、镜油、擦镜纸、载玻片、台秤。
  2、试剂:
  ①  0.7%柠檬酸钠溶液。
  ②  3%中性福尔马林溶液;8.3ml福尔马林溶液,醋酸钠1.1克,加蒸镏水91.7ml。
  ③  50%硝酸银溶液
  ④  2.0%明胶;称取2克明胶粉末,溶解于99ml蒸镏水中,加1ml甲酸。
  ⑤  甲醇、冰醋酸
  四、实验材料:
  小白鼠(雄)
  五、方法步骤:
  1.脱颈处死动物,取出睾丸,放入盛有1ml 0.7%柠檬酸钠培养器中。
  2.分离并剪碎精小管,用吸管轻轻吹打,使精小管内容物释放出。
  3.移至刻度离心管中,加4ml0.7%柠檬酸钠溶液制成细胞悬浮液,室温下低渗45-60分钟。
  4.在低渗终止前10分钟,加3%中性福尔马林液0.15ml,最终浓度0.1%,混匀。
  5.常规离心(1000rpm,10分钟),弃去上清液。
  6.加入甲醇和冰醋酸(3:1)混合液(临用时配制)5ml,固定10min。
  7.以1000rpm离心5min,弃去上清液。
  8.重复6-7步一次。
  9.加入1ml新鲜固定液,混匀。
  10.取细胞悬浮液,滴2-3滴于湿冷的载玻片上,置酒精灯上略加烘烤(或将载玻片置于热至80℃的电热板上)。
  11.银染:加4滴50%AgNO3和2滴明胶液于载玻片细胞面上,混匀,覆以擦镜纸,置酒精灯上烘烤(或将载玻片置于热至80℃的电热板上),至玻片标本呈褐黑色为止。一般为3-4min。
  12.移去擦镜纸,以蒸馏水快速漂洗,晾干。
  13.镜检。
  六:注意事项:
  制片的关键是长时间的低渗液处理和添加福尔马林溶液
  七、作业
  绘图表示光镜下联会复合体的形态。
  

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