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实验:叶绿体的提取

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  一、实验目的:
  通过本实验掌握分离叶绿体的技术,并了解制备细胞器的一般程序。
  二、实验原理:
  细胞器的分离一般采用差速离心法,细胞经过破碎后,在适当的介质中进行差速离心,利用细胞各组分质量大小不同,在不同离心力的作用下,即可得到所需的组分。
  三、实验用品:
  1、介质的配制:
  A:配制0.5M的蔗糖水溶液
  B:磷酸钾缓冲液:将KH2PO4(分析纯)溶于A液中,使其浓度为0.1M,PH调至7.4
  C:完全介质:将EDTA-Na2溶于B液中,使其浓度为10mM,PH调至7.4
  2 、低速大容量离心机
  3、研钵一付
  4、尼龙织物或纱布
  5、台秤;塑料杯2个(平衡时用)
  6、玻璃漏斗
  7、烧杯(200ml)2个;滴管1支;50ml量筒1个
  8、显微镜;擦镜纸
  9、盖玻片和载玻片
  10、吸水纸
  四.实验材料:
  菠菜叶或玉米叶
  五.方法步骤:
  1、将材料洗净吸干后,称取鲜重10g,剪成1-2cm2小块.
  2、加入20ml完全介质,在研钵中充分研碎(介质可分步加入)
  3、用双层尼龙织物或双层纱布过滤
  4、汁液在1000rpm下离心5分钟,弃去沉淀
  5、上清在2000rpm下离心12分钟
  6、将沉淀悬浮于15mlA液中,再以2000rpm离心12分钟,所得沉淀即为纯化的叶绿体
  7、将沉淀悬浮于约3mlA液中。
  8、制片,在高倍镜下观察
  9、在荧光显微镜下观察叶绿体的自发荧光(兰光作激发光,叶绿体发出火红色荧光)。
  六、注意事项:
  1、离心前要先平衡
  2、研磨时可先加部分介质,待研磨成匀浆后再加入剩余介质,介质过多不便研磨
  六、作业:
  绘制所观察到的叶绿体
  

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