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实验:微分干涉差显微镜的使用

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  一、实验目的:
  1.了解微分干涉差显微镜观察活细胞的原理
  2.了解微分干涉差显微镜的特殊组件和位置
  3.掌握微分干涉差显微镜的基本操作步骤
  二、实验原理:
  微分干涉差显微镜是根据通过物体内只分开1um或者更短距离的2束相干的光之间的相位差设计的,使标本内邻近2点的光程差被显微镜中特殊的光学系统转变为振幅(光强度)的变化。从而可以观察到标本内细微的结构,所以称为微分干涉差显微镜。根据照明方式,微分干涉差显微镜分为落射式和透视式2种,生物学和医学观察中多采用透射式微分干涉差显微镜。
  微分干涉差显微镜包含2块正交的偏光镜:一块靠近光源,称为起偏镜:另一块靠近目镜,称为检偏镜。在起偏镜和聚光镜之间放置第一块渥氏棱镜,在物镜和检偏镜之间放置第二块渥氏棱镜,这就是微分干涉差显微镜的基本结构。其基本原理是:来自光源的自然光经过起偏镜后成为线偏振光,以45度方位角(入射光偏振方向与晶体光轴之间的夹角)垂直入射到第一块渥氏棱镜,这时入射偏光分解为振动方向互相垂直、传播方向一致的O光和E光,穿过第一块渥氏棱镜的中心点后,由于晶体光轴方向的改变,O光和E光从中心点散发开一个很小的角度,经过聚光镜后产生出间隔只有1um甚至更短些的平行光,穿过样品的2个点。由于光线通过标本的2个点的光程长度不同,2束光线的相位都发生了变化,带有标本2个邻近点的相位差信息的这2束线偏振光通过物镜后,会聚在第2块渥氏棱镜的中心点,组合在一起的这2束线偏振光相位差不同,偏振方向互相垂直,不能直接干涉成像。当它们通过检偏镜后成为振动面相同、频率相同且具有一定相位差的相干光束,因而在中间像平面上形成干涉的物像。
  三、实验用品:
  微分干涉差显微镜  载玻片  盖玻片 镊子 消毒牙签 烧杯 吸管 0.9%生理盐水 吸水纸。
  四、实验材料:
  口腔黏膜上皮细胞
  五、方法步骤:
  (一)、制作人的口腔上皮细胞的临时装片
  1.在洁净的载玻片中央,滴一滴生理盐水。
  2.用消毒牙签的一端,在漱净的口腔侧壁上轻轻地刮几下。
  3.把牙签上附有碎屑的一端,放在载玻片上的生理盐水滴中涂抹几下。
  4.用镊子夹起洁净的盖玻片,将它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴,然后,轻轻地盖在水滴上。
  (二)、用微分干涉差显微镜观察人的口腔上皮细胞
  1.将10×微分干涉差物镜旋入光路,并调入相应的渥氏棱镜即N1。调焦距和起偏镜使其与检偏镜正交,产生最好的图像,并观察细胞的结构。
  2.将40×微分干涉差物镜旋入光路,并调入相应的渥氏棱镜即N 2。调焦距和起偏镜使其与检偏镜正交,产生最好的图像,并观察细胞结构。
  六、注意事项:
  1.选取的载玻片的厚度在1mm左右,不要太厚;要清洗干净。
  2.样品制备时,防止产生气泡。
  七、作业:
  1.根据所观察到的细胞,画一个口腔上皮细胞图,并且注出各部分的名称.
  

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